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美國紅楓種胚愈傷組織誘導(dǎo)!增殖培養(yǎng)技術(shù)研究初報
發(fā)布者:王振龍、張雷   發(fā)布日期:2008-08-25   點擊次數(shù):1340846

美國紅楓種胚愈傷組織誘導(dǎo)、增殖培養(yǎng)技術(shù)研究初報

王振龍 張雷 翟玉敏 代勇

遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 遼寧營口 撫順農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心 遼寧撫順

!!隨著我國城市環(huán)境建設(shè)由單純的綠化逐漸向綠

化’美化’彩化方向發(fā)展!很多企業(yè)從國外大量引

彩葉樹!但存在引種成本高’一些品種發(fā)芽率

低’種子繁殖易發(fā)生變異’常規(guī)繁殖周期長和繁殖

系數(shù)低’苗木量短期難以滿足市場需求的問題%針

對上述問題!我們以美國紅楓種胚為接種材料!進

行種胚愈傷組織誘導(dǎo)’增殖培養(yǎng)的研究!為進一步

開展包括美國紅楓在內(nèi)的彩葉樹組培快繁提供理論

依據(jù)%

!!材料和方法

!"!!材料

美國紅楓種子!市售%

!"#!方法

&8#8&!種子處理與接種

美國紅楓種子水浸#"A后!在超凈臺上于

!$C的酒精液中浸泡>$L!然后放入$8&C升汞液

中浸泡&$B0+!最后用無菌水沖洗"次!以無菌濾

紙吸干種子表面水分!剝?nèi)シN皮!將種胚分別接種

于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上!每瓶接種胚&個%

&8#8#!誘導(dǎo)培養(yǎng)

愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基見表&%培養(yǎng)基分別附加

$8=C 瓊脂和&8%C 的葡萄糖!培養(yǎng)室溫度為

#%^!光照為&%$$!#$$$-Y%#周后調(diào)查愈傷組

織誘導(dǎo)情況%

&8#8>!增殖培養(yǎng)

將愈傷組織切成$8%3B#小塊!轉(zhuǎn)接至增殖培

養(yǎng)基!每瓶接&塊愈傷組織%兩次增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)

基分別見表#’表>%培養(yǎng)基分別附加$8=C瓊脂

和&8%C的葡萄糖!培養(yǎng)室溫度為#%^!光照為

&%$$!#$$$-Y%分別于#%M和&%M調(diào)查兩次增殖

培養(yǎng)時不同培養(yǎng)基對愈傷組織增殖的影響%

#!結(jié)果與分析

#"!!不同培養(yǎng)基對愈傷組織誘導(dǎo)的影響

表!!不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)愈傷組織的情況

編號培養(yǎng)基

調(diào)查瓶數(shù)

#瓶$

誘導(dǎo)率

#C$

備注

& &(#NE]_2$8% & &$$

# NE]O2#]F22$8% & $ 種胚死亡

> &(#NE]O2&]F22$8% & $ 形成幼苗

" &(#NE]O2#]F22$8% & &$$

種胚接種&周后!#號和>號種胚子葉有發(fā)褐

跡象!無愈傷組織產(chǎn)生!>號種胚膨大&&號和"

號培養(yǎng)基誘導(dǎo)效果較好!"號中種胚的子葉表面逐

漸膨大!向上卷起!邊緣有粉紅色突起%#周后!

"號愈傷組織變大!由粉紅色轉(zhuǎn)為黃綠色且向中間

擴展!并逐漸長大!約#3B# 左右!質(zhì)地較致密!

而&號雖出現(xiàn)愈傷組織!但后期質(zhì)地較硬!突起

少!棕紅色&>號種胚發(fā)育成無菌幼苗&#號種胚

變褐死掉%相對而言!"號培養(yǎng)基比較適合誘導(dǎo)愈

傷組織#見表&$%另外!從#號與"號的培養(yǎng)基

成分來看!由于選用NE基本培養(yǎng)基的劑量不同!

培養(yǎng)效果則呈現(xiàn)明顯差異!說明培養(yǎng)基中無機鹽含

量低有利于愈傷組織誘導(dǎo)%這與胞外環(huán)境滲透壓大

小影響細胞分裂有關(guān)%

#"#!不同培養(yǎng)基對愈傷組織增殖的影響

初代誘導(dǎo)出的愈傷組織在培養(yǎng)一個月后!轉(zhuǎn)接

到增殖培養(yǎng)基!其結(jié)果見表#%綜合比較誘導(dǎo)率與

增殖系數(shù)二項指標!%號增殖效果好于&號和D

號!而且從跟蹤調(diào)查結(jié)果來看!%號愈傷組織短時

間內(nèi)誘導(dǎo)’增殖快!質(zhì)地致密疏松程度!利于下一

步的芽分化%這說明%號培養(yǎng)基附加的O2和較高

濃度的922!以及二者的添加比例更適合美國紅

楓愈傷組織的誘導(dǎo)和增殖%另外!培養(yǎng)基中附加

_2的作用效果不明顯是否與濃度低有關(guān)!需進一

步試驗驗證%

從第二次增殖培養(yǎng)結(jié)果#見表>$可以看出!

仍然是%號培養(yǎng)基愈傷組織誘導(dǎo)率高%轉(zhuǎn)接半個月

后!%號培養(yǎng)基中的愈傷組織就形成粉紅色突起!

隨著培養(yǎng)時間延長!粉紅色突起逐漸變成紫紅色和

淺綠色!并不斷擴大!最大的約有$8%3B#左右!!和=號中的愈傷組織誘導(dǎo)情況較差!有%$C以上

的愈傷組織生長慢"停止生長或死亡!所形成的愈

傷組織也較%號中的小得多#從培養(yǎng)基成分分析得知!愈傷組織誘導(dǎo)"增殖培養(yǎng)基必須同時添加一定

量的細胞分裂素和細胞生長素!而且不必添加

_2#!!另外!將%號增殖培養(yǎng)#個月"已老化的愈傷

組織再次轉(zhuǎn)接到%號新鮮培養(yǎng)基上!半個月后的愈

傷組織生產(chǎn)情況見表"#從愈傷組織的生長現(xiàn)象可

以看出!第三次增殖的愈傷組織從原來的細胞分裂

局限在組織外緣轉(zhuǎn)向了愈傷組織內(nèi)部深處的局部地

區(qū)!細胞的分裂出現(xiàn)了瘤狀結(jié)構(gòu)外表和內(nèi)部分化#

表-!.號增殖培養(yǎng)基內(nèi)的愈傷組織生長情況

愈傷組織數(shù)

$瓶%

生長情況愈傷組織體積$3B>%

#% 好&8%

&% 良好$8!

! 稍差$8%

$!結(jié)論

美國紅楓種胚愈傷組織最適誘導(dǎo)培養(yǎng)基為&&

#NE]D;O2#]F22$8%(最適增殖培養(yǎng)基為&&

#NE]D;O2#]922$8%#誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基均

添加&8%C葡萄糖"$8=C瓊脂(從培養(yǎng)基成分來

看!無機鹽含量低有利于愈傷組織的誘導(dǎo)#對美國

紅楓離體芽分化和生根試驗有待于進一步研究#

參考文獻!

)&*徐廷志8槭樹與園林)’*8 植物雜志8 北京’中國科

學(xué)院植物研究所!&<

)#*傅家瑞8 種子生理)N*8 北京’科學(xué)出版社!

&<<=8&D=;&="8

)>*熊!麗!吳麗芳8 觀賞花卉的組織培養(yǎng)與大規(guī)模生產(chǎn)

)N*8北京’化學(xué)工業(yè)出版社#$$>8

表#!不同培養(yǎng)基對美國紅楓種胚愈傷組織增殖的影響!

編號培養(yǎng)基接種數(shù)$瓶% 愈傷組織數(shù)$瓶% 誘導(dǎo)率$C% 增殖系數(shù)

& &&#NE]_2$8% ! > "#8= &8%!#8$

% &&#NE]O2#]922$8% ! ! &$$ >8$!%8$

D &&#NE]O2#]922$8"]_2$8" ! " %!8& #8$!>8%

!!注’#%M后調(diào)查結(jié)果

--來源:【遼寧農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報】

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